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發(fā)布日期:2024/11/14 9:00:00

 細胞STR鑒定應用于生物醫(yī)學研究領域的哺乳動物細胞被錯誤鑒定和交叉污染的問題,一直是一個普遍存在的突出問題。

     據(jù)統(tǒng)計,國外實驗室有20%左右的細胞株被錯誤鑒定和交叉污染,NIH和ATCC近兩年都對此發(fā)出呼吁,要求研究者對細胞進行鑒定。近年來,大量研究表明STR基因分型方法是進行細胞交叉污染和性質鑒定的最有效和準確的方法之一,STR基因分型應用于細胞鑒定已被ATCC等機構強烈推薦。美國的ATCC細胞庫、德國的DSMZ細胞庫以及日本的JCRB細胞庫等為STR分型提供了各細胞株的數(shù)據(jù)供比對。

    STR(Short Tandem Repeat,短串聯(lián)重復序列)基因位點由長度為3-7個堿基對的短串連重復序列組成,這些重復序列廣泛存在于人類基因組中,可作為高度多態(tài)性標記,被稱為細胞的DNA指紋,其可通過PCR(聚合酶鏈式反應)來檢測。STR基因座位上的等位基因可通過擴增區(qū)域內重復序列的拷貝數(shù)的不同來區(qū)分,在毛細管電泳分離之后可通過熒光檢測來識別。隨后通過一定的計算方法,即可根據(jù)所得的STR分型結果與專業(yè)的細胞STR數(shù)據(jù)庫比對從而推算出樣品所屬的細胞系或可能的交叉污染的細胞系名稱。

     我們?yōu)檫M一步提高鑒定的分辨率,除了包含ATCC檢測的8個STR和1個性別決定位點Amelogenin外,另新增了12個高度多態(tài)性位點,共檢測21個STR位點。

 

送鑒定樣本要求:

1.基因組DNA: OD 260/280 在 1.8~2.0 之間, 濃度≥50ng/μl,體積≥20μl;

2.細胞沉淀:

(1)細胞數(shù)≥10^6;

(2)貼壁細胞經胰蛋白酶消化后,離心收集細胞沉淀;

(3)懸浮細胞直接離心收集細胞沉淀;

(4)PBS 清洗細胞沉淀,盡可能去除培養(yǎng)基與胰酶;

3.凍存細胞:細胞數(shù)≥10^6,凍存細胞從液氮罐中,37℃水浴復蘇,融化后離心收集細胞沉淀,盡可能去除凍存液,否則會影響 DNA 抽提質量;

4.樣本寄送:應在送樣包裹中放置足量的冰袋或干冰,以減少在運輸過程中因溫度變化導致DNA 降解的可能;如無法使用冷凍寄送,請將細胞沉淀用真空抽干(無殘留任何液體、不可加熱);

5.為了保證 DNA 抽提質量,確保細胞在消化或凍存前,細胞狀態(tài)良好,處于生長對數(shù)期;不建議以細胞懸液或細胞培養(yǎng)瓶形式寄送樣本。

6.客戶需要提供細胞樣品,管壁標記清楚細胞的名稱,數(shù)量較多時要標好標注,并附送鑒清單。

7.每次鑒定的周期為1周,具體細節(jié)請與相關客服人員溝通好。

8.BNCC354912  人源細胞STR鑒定服務,800元/次

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